1 實(shí)驗(yàn)部分
1. 1 主要儀器與藥品
HP21100 安捷倫液相色譜儀 , 包括HP1100 四元泵, 自動(dòng)進(jìn)樣器,VWD 檢測(cè)器和色譜工作站;UV 21800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) ,U PW S2IV 2107 超純水器 , 色譜純甲醇、超純水, 單寧酸(A. R. 分子式C76H52O46, 分子量1701. 25) 貴州遵義市第二化工廠, 余甘子(采集于泉州惠安縣)。
1. 2 色譜條件
色譜柱為HypersilODS (4. 0×125mm , 5Lm) 色譜柱; VWD 檢測(cè)器調(diào)節(jié)檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm; 流動(dòng)相為甲醇和水(體積比80∶20) ; 流速為0. 5mL ·m in- 1; 柱溫: 室溫; 進(jìn)樣量2LL。
1. 3 樣品處理
篩選新鮮的余甘子, 清洗去核, 風(fēng)干, 稱取350. 0g 果肉于攪拌機(jī)中搗碎。將搗碎的余甘子果肉用水浸提,得到350. 0mL 提取液。用0. 45Lm 濾膜過(guò)濾, 進(jìn)樣2LL。
12. 4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
于電子天平上稱取0. 0030g 單寧酸(A. R. ) , 用乙醇、水、丙酮體積比為69. 9%、29. 8%、0. 3% 的溶液作溶劑溶解并定容, 制備成濃度為30. 00Lgöm L 的單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液100mL。上述標(biāo)準(zhǔn)溶液用0. 45Lm 濾膜過(guò)濾備用。進(jìn)樣2LL 分析, 在該條件下, 標(biāo)樣和余甘子樣品色譜圖見(jiàn)圖1—2。
2 結(jié)果與討論
2. 1 色譜條件選擇
用UV 21800 紫外2可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)得單寧酸在275nm 處有強(qiáng)吸收, 雖然丙酮在275nm 附近也有較大吸收,但不影響單寧酸的分析定量, 故用VWD 檢測(cè)器調(diào)節(jié)檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。實(shí)驗(yàn)用HypersilODS 色譜柱, 改變流動(dòng)相(甲醇和水) 配比, 流速, 柱溫, 結(jié)果表明流動(dòng)相為甲醇和水(體積比80∶20) ; 流速為0. 5mL ·m in- 1; 柱溫: 室溫時(shí)的出峰情況為*。
2. 2 單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液溶劑的選擇
水、乙醇、丙酮都可用于單寧酸的提取, 為了使本方法的使用范圍更廣, 分別實(shí)驗(yàn)了以水、乙醇、丙酮不同配比的混和溶液作標(biāo)液的溶劑, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明用乙醇、水、丙酮體積比為69. 9%、29. 8%、0. 3% 的溶液作溶劑時(shí)出峰情況為*。
2. 3 線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)
分別配制單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液120、150、180、210、240ng/m L 用0. 45Lm濾膜過(guò)濾, 進(jìn)樣后得到兩種單寧酸的回歸方程, 單寧酸1: y = m 1x + b1,m 1= 3. 61220×10- 1, b1= - 12. 62814, r= 0. 99996; 單寧酸2: y =m 2x + b2, m 2 = 3. 30394×10- 1, b2 = - 4. 24693, r= 0. 99998。線性范圍為120—240ng/mL。
2. 4 精密度實(shí)驗(yàn)
用120ngmL 單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液, 重復(fù)進(jìn)樣4 次, 測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。
2. 5 余甘子中單寧酸提取液加標(biāo)回收率的測(cè)定
取已知單寧酸含量的余甘子水提液稀釋液5mL , 加入240ngm L 的單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL , 再用70% 乙醇稀釋, 定容至25mL。將以上溶液用0. 45Lm 濾膜過(guò)濾, 按2. 2 項(xiàng)色譜條件進(jìn)行HPLC分析, 測(cè)定單寧酸的回收率, 結(jié)果見(jiàn)表2。
3結(jié)論
應(yīng)用液相色譜法測(cè)定余甘子中單寧酸的含量操作簡(jiǎn)便, 3m in 可完成單次檢測(cè), 在120—240ng/mL 的范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系, 相關(guān)系數(shù)達(dá)99. 996% 以上, 加標(biāo)回收率在99. 7% —107. 5% 之間。本方法快速, 方便, 可靠, 可用于多種物質(zhì)中單寧酸含量的測(cè)定。
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