合成色素主要指用人工合成的方法從煤焦油中制取或以苯、甲苯、萘等芳香烴化合物為原料合成的有機(jī)色素,不但能改善食品色澤,且成本低廉、著色力強(qiáng), 被廣泛應(yīng)用于食品中。WHO和我國對目前允許使用的合成色素均進(jìn)行了嚴(yán)格的毒性試驗(yàn),并分別制定出他們的每日允許攝入量（ADI值）。人工合成色素應(yīng)用非常廣泛。長期食用人工合成色素將會在體內(nèi)蓄積,對腎臟、肝臟產(chǎn)生一定的傷害。
1材料與方法
1.1儀器及色譜檢測條件
Agilent1100液相色譜儀(附紫外檢測器);AgilentC18色譜柱(416mm×250mm)。流動(dòng)相:甲醇:乙酸銨溶液((pH=4,0102mol/L);梯度洗脫:甲醇:20%～98%,12min;紫外檢測:254nm波長;流速:110mL/min;柱溫:30°C;進(jìn)樣量:20μL。
1.2試劑
人工合成色素胭脂紅、檸檬黃、日落黃、亮藍(lán)配成1100mg/mL的混合色素標(biāo)準(zhǔn)儲備液;硫酸銅、氫氧化鈉、乙酸鋅、亞鐵氰化甲、檸檬酸、甲酸、乙醇、氨水、乙酸、乙酸銨為分析純;甲醇為色譜純;聚酰胺粉(200目);雪糕樣品(市售)。
1.3堿性硫酸銅預(yù)處理
準(zhǔn)確稱取試樣15100g,加入蒸餾水30mL使樣品融化稀釋,再加入20mL硫酸銅溶液(100g/L)及414mL氫氧化 鈉溶液(40g/L),定容至100mL,混勻,沉淀,靜置30min,過濾,收集濾液,備用。
1.4乙酸鋅-亞鐵氰化甲預(yù)處理
準(zhǔn)確稱取試樣15100g,加入蒸餾水30mL使樣品融化稀釋,再加入乙酸鋅溶液(稱取2119g乙酸鋅,加入3mL冰乙酸,定容至100mL)和亞鐵***溶液(1019g/100mL)各5mL定容至100mL,混勻,沉淀,靜置30min,過濾,收集濾液,備用。
1.5色素提取
將濾液用檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至pH=6,水浴加熱至60°C。將3g聚酰胺粉倒入加熱后的樣液中充分?jǐn)嚢?以G3垂融漏斗抽濾。用60°C、pH=4的水(將蒸餾水用檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至pH=4)洗滌3～5次,再用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3～5次,zui后用蒸餾水洗滌至中性。用無水乙醇-氨水-水(7+2+1)混合溶液作為解吸液解吸3～5次,每次5mL,收集解吸液,加乙酸調(diào)節(jié)pH=7。70°C水浴加熱揮發(fā)有機(jī)溶劑至近干,加水定容至10mL,經(jīng)0145μm濾膜過濾,待測。
1.6加標(biāo)樣品的制備
準(zhǔn)確稱取合成色素本底值為零的雪糕樣品15100g,加入一定量的人工合成色素標(biāo)準(zhǔn)品,混合均勻即為加標(biāo)樣品。
2液相色譜儀測定雪糕中的合成色素的結(jié)果與分析
2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍
混合色素標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制成110、510、1010、2010、5010μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列,HPLC法檢測得到標(biāo)準(zhǔn)色譜圖(圖1)。以峰面積為縱坐標(biāo)y(mAu3s),濃度為橫坐標(biāo)x(μg/mL),得到四種人工合成色素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和R2值如下:檸檬黃y=621266x-311549,R2=019993;胭脂紅y=401390x+214743,R2=019998;日落黃y=531541x-317724,R2=019998;亮藍(lán)y=1851520x+121727,R2=019995。標(biāo)準(zhǔn)系列在110～5010μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.2加標(biāo)回收率及精密度
對加標(biāo)樣品分別按堿性硫酸銅預(yù)處理法和乙酸鋅-亞鐵氰化甲預(yù)處理法進(jìn)行操作,重復(fù)三次,結(jié)果如表2所示。
2.3樣品測定
稱取某品牌菠蘿味雪糕樣品15100g,按乙酸鋅-亞鐵氰化甲法處理雪糕樣品,并提取人工合成色素,按上述色譜條件測定,平行試驗(yàn)3次。檢測結(jié)果如圖2所示,表明樣品中含有檸檬黃色素。
三次平行試驗(yàn)的測定值如表3所示。根據(jù)《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中的規(guī)定,檸檬黃色素在冷凍飲品中zui大使用量為0105g/kg[5],即50mg/kg。可見,該樣品中檸檬黃的含量遠(yuǎn)低于*值。
3液相色譜儀測定雪糕中的合成色素的結(jié)論
用堿性硫酸銅法處理的樣品精密度良好,但準(zhǔn)確度較差。用乙酸鋅-亞鐵氰化甲法處理的雪糕樣品加標(biāo)回收率較高,準(zhǔn)確度和精密度良好。用乙酸鋅-亞鐵氰化甲預(yù)處理法進(jìn)行樣品測定,準(zhǔn)確度較好。
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