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保留值定性的方法在液相色譜中的運(yùn)用
更新時(shí)間:2016-05-05   點(diǎn)擊次數(shù):3229次

氣相或液相色譜操作中,當(dāng)儀器的操作條件保持不變時(shí), 任一物質(zhì)的色譜峰總是在色譜圖上固定的位置出現(xiàn), 即有一定的保留值。又包含:死時(shí)間,保留時(shí)間,校下保留時(shí)間,保留體積,等等。

在液相色譜中保留值定性的方法主要是用直接與已知標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照的方法。當(dāng)未知峰的保留值( t' R或V' R)與某一已知標(biāo)準(zhǔn)物*相同時(shí),則未知峰可能與此已知標(biāo)準(zhǔn)物是同一物質(zhì),特別是在改變色譜柱或改變洗脫液的組成時(shí),未知峰的保留值與已知標(biāo)準(zhǔn)物的保留值仍能*相同,則可以基本上認(rèn)定未知峰與標(biāo)準(zhǔn)物是同一物質(zhì)。
    在利用保留值數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)和定性分析時(shí)要特別注意到:由于液相色譜柱的填柱技術(shù)較復(fù)雜,液相色譜所使用的色譜柱的重現(xiàn)性目前還很不理想,即使是同一批號(hào)的 柱子,重現(xiàn)性也不一致,這就使得使用保留值數(shù)據(jù)進(jìn)行分析受到限制。因此,目前保留值數(shù)據(jù)只能作為定性分析的參考??梢愿鶕?jù)這些數(shù)據(jù)和對(duì)樣品的了解來(lái)選用已 知標(biāo)準(zhǔn)物,再用這些已知標(biāo)準(zhǔn)物與未知物在同一色譜條件下直接進(jìn)行對(duì)比。
    zui簡(jiǎn)單的保留值定性方法是將已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加到樣品中去,若使某一峰增高,而且在改變色譜柱或洗脫液的組成后,仍能使這個(gè)峰增高,則可基本認(rèn)定這個(gè)峰所代表的組分與已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為同一物質(zhì)。

目前一些HPLC儀器配備了三維圖譜檢測(cè)器,如二極管陣列檢測(cè)器,在進(jìn)行未知組分與已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)比對(duì)時(shí),除了比較保留時(shí)間外,還可以比較兩個(gè)峰的立體圖 形。如在使用二極管陣列檢測(cè)器時(shí),除了比較未知組分與已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間外,還可比較兩者的紫外光譜圖,如果保留時(shí)間一樣,兩者的紫外光譜圖也*一 樣,則可基本上認(rèn)定兩者是同一物質(zhì);若保留時(shí)間雖一樣,但兩者的紫外光譜圖有較大差別,則兩者不是同一物質(zhì)。這種利用三維圖譜比較對(duì)照的方法大大提高了保 留值比較定性方法的準(zhǔn)確性。美國(guó)Bio-Rad公司的血藥分析儀(Remeeli)就是依靠三維圖譜的綜合數(shù)據(jù)的分析來(lái)鑒別未知藥物的。

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