1 液相色譜柱的使用說明:
( 1 ) 液相色譜柱色譜柱使用前注意事項(xiàng):
液相色譜柱的儲(chǔ)存液無特殊說明,均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前,一定要注意液相色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應(yīng)先用10 %左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出,堵塞色譜柱。
?。?2 ) 流動(dòng)相:
流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純,配流動(dòng)相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過0.45μm 的濾膜過濾一次則更好,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的 ph 值適用范圍是 2.0-8.0 , bds c18 適合于堿性化合物, ph值適用范圍為 2.0-10.0 。當(dāng)必須要在 ph值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí),每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗,并*置換掉原來所使用的流動(dòng)相。
?。?3 ) 樣品:
樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱( spe)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理,要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí),所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
2 色譜柱的保存
?。?1 ) 反相液相色譜柱色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng):
使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用 10% 的甲醇 / 水沖洗 30 分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗 30 分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入 10% 的甲醇,防止將填料沖塌陷。
?。?2 ) 長期保存色譜柱:
如色譜柱要長時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲(chǔ)存于水(含防腐劑*或柳硫汞)中,并將購買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度是室溫。
3 色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法
色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高,如果柱壓是在長時(shí)間使用過程中緩慢增加,屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外),可能的原因有如下幾點(diǎn):
( 1 )色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染;
?。?2 )色譜柱頭的填料被樣品污染;
( 3 )色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑,形成結(jié)晶析出;
( 4 )流動(dòng)相 ph 值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。
解決辦法如下:
( 1 )如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下色譜柱頭,將其放在 10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗 10 分鐘,后再用純水超聲 10 分鐘,重新裝入色譜柱。
?。?2)如確定色譜柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內(nèi)前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細(xì)修復(fù)后,重新安裝上柱頭螺絲。
( 3 )如確定定是鹽結(jié)晶,用 10% 的甲醇 / 水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。
?。?4 )如果因 ph 值使用不當(dāng),很難恢復(fù)。